pCold-SUMO-10His原核蛋白表達(dá)試劑盒pCold-SUMO-10His)是在pCold-SUMO載體基礎(chǔ)上改造而成，該載體啟動(dòng)子(CS Promoter)來(lái)源于南極嗜冷細(xì)菌，

在低溫下(15度)才能啟動(dòng)蛋白的表達(dá)。低溫下細(xì)菌生長(zhǎng)緩慢，使得蛋白合成速度減慢，從而最大限度的提高了蛋白正確折疊的

幾率，提高了蛋白可溶性表達(dá)，增強(qiáng)了活性蛋白的表達(dá)比率。該表達(dá)系統(tǒng)所包含的SUMO tag可以極大地提高小分子量蛋白的

表達(dá)量，而且能進(jìn)一步提高蛋白的可溶表達(dá)幾率。另外，TEE信號(hào)肽可增強(qiáng)冷啟動(dòng)子調(diào)控下目的蛋白的高表達(dá)。

升級(jí)后的pCold-SUMO-10His載體，其SUMO蛋白標(biāo)簽含有10個(gè)組氨標(biāo)簽（10His tag），使其結(jié)合Ni-NTA的能力更強(qiáng)。

與較早版本的pCold-SUMO表達(dá)系統(tǒng)相比，pCold-SUMO-10His表達(dá)系統(tǒng)在保留了原有系統(tǒng)的蛋白可溶性生產(chǎn)能力、

高特異性剪切能力的情況下，顯著提高了與Ni-NTA的結(jié)合能力。通過(guò)與Ni-NTA結(jié)合能力的提高，在以下三個(gè)方面改善了

生產(chǎn)重組蛋白的性能：

（1）提高了粗蛋白樣品中目標(biāo)蛋白的捕獲能力，從而提高純化產(chǎn)量；

（2）在蛋白純化過(guò)程中可以使用更高濃度的咪唑進(jìn)行漂洗，去雜蛋白的能力明顯提升，從而獲得更高純度的重組蛋白；

（3）在重組蛋白酶切去除SUMO標(biāo)簽后，利用Ni-NTA去除SUMO標(biāo)簽更為，獲得純度更高的無(wú)標(biāo)簽?zāi)繕?biāo)蛋白。組分

組分名稱(chēng)數(shù)量保存

pCold-SUMO-10His Vector (200 ng/μl)50 μl-20℃

pCold-SUMO-10His-Positive Plasmid (20 ng/μl)20 μl

SUMO Protease (10 U/μl)100 μl

10×SUMO Buffer1 ml

rTEV Protease (10 U/μl)100 μl

20×rTEV Buffer1ml

1700X氯霉34mg/ml）1 ml

200X L-阿拉伯糖（100mg/ml）1 ml

1000X四環(huán)素（2mg/ml）1 ml

E.coli Transfer Reagent1.2 ml

Lyophilized Arctic (DE3) competent cells（10T)1瓶

Lyophilized BL21(DE3)Chaprone competent cells (10T)1瓶

主要特征

冷啟動(dòng)子，低溫誘導(dǎo)表達(dá)，最大限度地提高蛋白地可溶性

分子伴侶可協(xié)助蛋白的正確折疊

可大大的提高蛋白表達(dá)量

兩種宿主菌和兩種蛋白酶可選，使實(shí)驗(yàn)方案更加靈活

應(yīng)用

包涵體蛋白的最佳解決方法，提高蛋白的可溶性?xún)?yōu)化表達(dá)。

pCold-SUMO-10His原核蛋白表達(dá)試劑盒恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類(lèi)型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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