rTEV蛋白酶試劑重組型）是經(jīng)過(guò)基因工程改造后的重組蛋白酶，它可特異性識(shí)別Glu-Asn- Leu-Tyr -Phe-Gln-Gly七氨基酸序列，

并高特異性、高活性剪切(剪切位點(diǎn)在Gln-Gly之間)。TEV蛋白酶經(jīng)6XHis標(biāo)簽純化而得(含組胺酸標(biāo)簽)，純度達(dá)99％，

剪切反應(yīng)完畢后可通過(guò)Ni-NTA Resin(Cat.No.: C0401, HaiGene)去除。TEV酶在4℃-30℃溫度、pH范圍（6.0-8.5）

反應(yīng)條件下均具有活性(見(jiàn)下表)。

不同溫度下剪切活性(%)

 4℃16℃21℃30℃

0.5 h34585670

1 h58807890

2 h71999999

3 h84999999

組分

組分名稱數(shù)量

rTEV Protease (10 U/μl)100 μl

20XrTEV Buffer1 ml

0.1M DTT100 μl

單位定義

在1XrTEV Buffer（50 mM，pH8.0, 0.5 mM EDTA, 1mM DTT），30℃反應(yīng)1h，剪切>85％的3 μg底物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位。

應(yīng)用

融合蛋白標(biāo)簽剪切去除。

儲(chǔ)存

長(zhǎng)期儲(chǔ)存-70℃，可儲(chǔ)存2年，-20℃可儲(chǔ)存6個(gè)月。

rTEV蛋白酶試劑恒溫?cái)U(kuò)增使用策略及實(shí)例展示

應(yīng)用實(shí)例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標(biāo)準(zhǔn)定量PCR儀或恒溫?zé)晒鈨x上進(jìn)行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測(cè)結(jié)果，可以看到檢測(cè)反應(yīng)<20min(達(dá)平臺(tái)期)。

應(yīng)用實(shí)例2： 用 LP1002引物組進(jìn)行的LAMP測(cè)試。OG變色法為終點(diǎn)變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽(yáng)性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測(cè)結(jié)果。

應(yīng)用實(shí)例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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